免疫组化背景_免疫组化p63(一)

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免疫组化背景

免疫组化背景_免疫组化p63(一)

免疫组化分析方法与实例那么染出来的免疫组化片子怎么进行分析放到文章中呢概括来说免疫组化分析主要有两种方法阳性着色细胞计数法和染色强度评分法前者是在光学显微镜下随机多个视野下计数阳性着色细胞后者则是在下按染色强度和染色阳性范围评分最终分数相加但组织样品的病理学分析仍然是耗时且主观的程序其中人工判断染色强度来评分直接受到视觉偏差的影响且阳性细胞计数往往不能自动化进行导致免疫组化分析费时费力因此常借助软件进行客观分析得到更加直观和稳定的数据最常用的就是大名鼎鼎的ImageJ染色强度评分法则是通过ImageJ将阳性细胞的平均灰度值染色强度和阳性面积百分比染色面积共同作为IHC测量指标最终给出四种评分Highpositive3Positive2LowPositive1andNegative0阳性着色细胞计数法就是通过ImageJ对片子进行颜色处理转为非黑即白的二值化图片进而进行自动化计数得到结果最后我们来两张图看一下图1Foxp3是Treg的主要调节因子可用于鉴定Treq细胞DAPI可与DNA强力结合可用于观察阴性细胞毕竟都有细胞核嘛那么图1表达的意思就是不同浓度的药物对肿瘤微环境中的Treg细胞的影响可以看到背景深蓝色为DAPI染色的阴性细胞天蓝色为标记的Treg细胞通过药物作用肿瘤微环境中Treo细胞数量不等右面柱状图表明进行了定量分析也是具有统计学意义的这张图中图2vehicle为注射生理盐水的对照组rGDF11为注射药物的实验组粗略一看我们可能不能明确的看出来两组的差异但是通过染色强度定量分析发现实验组的pSmad23pcFosnfatc1着色显著多于对照组具有统计学意义其实我们在很多文章中往往看不到统计分析图这是因为我们做免疫组化的目的不一样有的可能只是为了证明通过实验条件某种蛋白是不是表达了或者说这种蛋白只在某种细胞中表达比如肿瘤细胞此时单列出免疫组化图片足以说明问题

如何选择抗体宿主单克隆还是多克隆选择抗体时你是否感到困惑别担心让我们来理清这个看似简单却复杂的问题一般来说Westernblot实验推荐使用多克隆抗体而免疫组化和免疫荧光则更适合单克隆抗体这是因为多克隆抗体在Westernblot中可能导致杂带而在免疫组化和免疫荧光中则可能增加背景然而这些观点也存在一些矛盾宿主类型在临床医学实验中抗体主要来自两种宿主小鼠和兔除了对二抗的选择有影响外鼠抗和兔抗在其他方面并无太大差异尽管如此实验室中仍有一些老师坚持认为鼠抗不适合用于小鼠组织样本的Westernblot检测因为可能会产生无法忽略的杂带和双条带而使用兔抗后这些问题便不再出现兔抗的优势兔抗在市场上的普及率逐渐上升这可能与兔抗的生产工艺有关兔抗的批次间一致性较高品控稳定这在国内品牌和进口品牌中都有体现因此在选择抗体时不妨考虑兔抗选择单克隆还是多克隆这实际上取决于试剂厂家的生产技术在某些情况下只能找到兔抗而某些蛋白则只能找到多克隆抗体同样进口品牌和国内品牌在选择上也存在差异因此单克隆和多克隆的选择并没有想象中那么有选择性总结在选择抗体时考虑宿主类型实验类型以及生产技术等因素确保你的选择能够最大化实验的准确性和可靠性记住正确的选择是实验成功的关键

西湖大学生命科学学院夏令营回忆录面试复盘在西湖大学生命科学学院的夏令营中面试环节真是让人又爱又恨整个面试过程大约25分钟包括12分钟的PPT汇报全英文制作但可以选择中文或英文汇报和13分钟的专家问答及英语口语考核提问环节真是五花八门你做了哪些研究工作请在30秒内解释你的研究意义你的研究和专利之间有什么关系你的专利模型看起来很复杂花了多久时间为什么选择去实验室学习基础实验能否介绍一下其中一个实验的流程免疫组化的流程是怎样的这些问题真是让我又爱又恨但也在一定程度上展现出了专家们的严谨和热情一些感性认识西湖大学的图书馆真是舒适到处都是懒人沙发视野开阔能看到瞬息万变的云朵和晚霞还有一些小细节比如公寓楼电梯口的公用花露水小区楼下篮球场旁的儿童公园没事可以去荡秋千每天晚上我和室友都会去西餐厅直到看到西湖官微的一篇推送才知道那位厨师小哥还有这样的个人故事有幸体验了他们有名的咖喱牛肉饭和好吃的披萨一些收获和思考这次夏令营让我深刻感受到大家对自己的研究课题都充满了激情和想法浓厚的学科交叉氛围让我印象深刻比如化学背景的研究者会从分子结构的角度看问题路上拉一个同学聊聊天灵感可能就来了有个同学问怎么确定一个热爱的方向自己感兴趣的研究问题老师的回答非常富有哲理兴趣是个假问题因为了解还很模糊多问问自己更喜欢从什么角度去了解问题蛋白质小鼠细胞宏观微观去看看实验室真正在做什么观察小鼠行为养果蝇胚胎发育在与世界的一次次交手中我们逐渐发现自己感兴趣的东西西湖夏令营带给我的思考还有很多潜在影响也许也是巨大的特别感谢这个夏天的经历共勉拥抱R

SulfoCy7染料生物成像明星嘿大家好今天我们来聊聊一种超级酷的荧光染料SulfoCy7bisSE它的另一个名字是SulfoCyanine7bisSE或者SulfoCyanine7bisSuccinimidylEster这个染料在生物成像领域可是个大明星尤其在免疫组化流式细胞术和荧光共振能量转移FRET等实验中简直是不可或缺的存在SulfoCy7bisSE的基本信息首先让我们来看看这个染料的分子结构和一些基本参数SulfoCy7bisSE的分子式是C47H53KN4O14S2分子量大约是10012它的外观是深蓝色的固体最大吸收波长和发射波长分别是746nm和772nm这个染料在水溶液中表现出色具有高效和稳定的特点反应机理SulfoCy7bisSE的工作原理其实并不复杂它是一种高效稳定的水溶性近红外荧光染料通过与生物分子发生反应可以实现对生物体的可视化标记在生物成像过程中这种染料能够提供清晰持久的荧光信号帮助科研人员更好地观察和记录实验结果其他相关试剂除了SulfoCy7bisSE还有一些与之相关的试剂比如SulfoCy7carboxylicacidCAS号1251915044SulfoBisNNcarboxylicacidCy5CAS号2353410101SulfoCy7alkyneCAS号2183440562这些试剂在生物成像和化学实验中也有着广泛的应用大家可以根据自己的需求选择使用个人小贴士我自己在做实验的时候特别喜欢用SulfoCy7bisSE尤其是免疫组化的时候信号特别清晰背景也很干净不过这种染料还是比较贵的建议大家在使用的时候尽量节省避免浪费好了今天的分享就到这里如果你对SulfoCy7bisSE或者其他生物成像试剂有兴趣欢迎留言讨论哦

RNAscope原位检测新金标在非小细胞肺癌的石蜡组织切片中RNAscope技术与蛋白IHC共同检测Foxp3RNAPDL1RNA和CD8蛋白质的表达变化从而在肿瘤微环境中指导临床用药RNAscope是一种原位杂交技术能够在组织或细胞中检测单一分子的RNA它基于ACD专利的双zz型探针设计通过寡核苷酸互补配对的信号放大系统在显微镜下观察到荧光或可见光的信号该技术不仅实现了单一分子RNA的原位检测还能在一张组织切片上最多标记4个不同的RNA分子根据试剂盒的不同分为荧光试剂盒和可见光试剂盒RNAscope适用于多种类型的样本如石蜡包埋样本冰冻样本贴壁细胞和悬浮细胞样本等推荐使用RNAscope二代荧光试剂盒323100RNAscopeMultiplexFluorescentReagentKitv2它具有以下优点最多可在一张组织切片上标记4个不同的RNA分子适用于任意样本类型石蜡切片固定冰冻切片新鲜冰冻切片贴壁细胞和悬浮细胞荧光拍照可有效控制背景和信噪比基于ACD专利的信号级联放大系统灵敏度可达120个RNA拷贝极力推荐RNAscope荧光与免疫组化IHC共染操作简单快速重复性好无需RNasefree的环境类型免疫组化操作流程68小时完成实验RNAscope二代荧光试剂盒检测工作流程FFPE样本和RNAscope与免疫组化IHC共检测工作流程图6提供了详细的操作步骤

Q医生赴美博士后之路挑战与收获Q医生的背景类型CSC公派博士后工作背景三甲医院医生教育背景博士研究方向新生儿疾病学术背景1篇一作SCI论文主持及参与课题9项申请难点必须要有博士后头衔申请过程国家留学基金委CSC对博士后申请人的要求很严格年龄不能超过40岁博士毕业时间要在3年之内Q医生刚好符合这些条件因此他希望申请到CSC公派博士后项目为了赶上当年的申报时间我们申请团队投入了大量的时间和精力因为Q医生首选美国并要求专业相符所以我们重点匹配了美国的相关高校及医疗机构Q医生拥有丰富的临床工作经验和不错的学术背景熟悉基本的实验室技术如细胞培养PCRWesternblot免疫组化等通过多次沟通及面试阿尔伯特爱因斯坦医学院和约翰霍普金斯大学都同意接收并发来了邀请函经过综合考虑Q医生选择了Hopkins的Offer进行申报并获得批准在办理CSC派出手续的同时我们通知对方已经获得资助并希望办理DS2019表格但不知何故该导师和HR都没有回复几次联系不上对方后为保险起见我们在继续跟进Hopkins方面进展的同时征得Q医生的同意又开展了新一轮的申请不久凯斯西储大学医学院彩虹宝宝和儿童医院RainbowBabiesChildrensHospital新生儿科主任回复并明确表示愿意接收该导师的研究涉及临床和基础邮件中还详细介绍了实验室构成目前所从事的项目及临床科研情况该医院连续20年被美国新闻与世界报道评为全美最好的儿童医院而新生儿科则排名TOP4这些条件更加符合Q医生的心理预期通过面试后对方终于发来了邀请函头衔明确标注为PostdoctoralResearcher博士后研究人员接下来就是CSC改派和签证环节了好在一切还算顺利Q医生目前已经出国开始了异国博士后生涯我们祝他学有所成申请体会因为CSC公派留学周期比较长从开始申请到逐级审批CSC办理派出直至出国通常要一年以上在这期间可能会发生导师变动接收学校政策改变等意外情况因此我们需要及时调整做出备选方案尽量满足申请人要求避免错过CSC的派出机会

CNS肿瘤咋鉴别CNSLowgradeDiffuselyInfiltrativeTumorsWithINI1DeficiencyCNSLGDITINI1是一种罕见的低级别中枢神经系统肿瘤具有高倾向发展为次级INI1deficientRhabdoidTumors的特点与之相比AtypicalTeratoidRhabdoidTumorATRT是一种好发于婴幼中枢神经系统的高度恶性肿瘤特征为肿瘤细胞呈横纹肌样细胞形态并伴有INI1缺失或偶有BRG1缺失CNSLGDITINI1与ATRT在形态上有所不同CNSLGDITINI1表现为浸润性生长的小细胞性肿瘤细胞核圆形卵圆形不规则形胞浆少其间退变的神经元细胞和大的反应性星形细胞肿瘤背景水肿黏液样或是胶原化未见核分裂相而ATRT则以横纹肌样肿瘤细胞为特征在免疫组化染色方面CNSLGDITINI1和ATRT均表现为INI1核阴性此外除了INI1表达缺失外CNSLGDITINI1与ATRT在免疫组化表型上也有所不同CNSLGDITINI1可能是一种惰性肿瘤但具有很高的进展为RT的倾向性除了INI1表达缺失外CNSLGDITINI1与其他肿瘤如非典型性多形性黄色瘤型星形细胞瘤神经节细胞瘤脑膜瘤等在形态和免疫组化表现上也存在差异这些肿瘤也可能进展为ATRT综上所述CNSLGDITINI1与ATRT在形态特征和免疫组化表现上存在明显差异需要仔细鉴别诊断对于疑似病例应进行详细的病理学检查和免疫组化分析以确定肿瘤的类型和预后

病理图像分析仪一背景与定义病理图像分析仪是一种用于对病理切片图像进行数字化处理分析和诊断的先进医疗设备它通过将传统的光学显微镜下的病理图像转化为数字信号利用计算机软件和算法进行定量和定性的分析二工作原理1图像采集使用高分辨率的数字相机或扫描仪获取病理切片的图像2图像处理对采集到的图像进行去噪增强色彩校正等处理以提高图像质量3特征提取运用算法提取图像中的细胞形态组织结构染色强度等特征4数据分析通过与已知的病理数据库进行对比运用统计学和机器学习方法进行诊断和分类三主要功能1细胞计数与测量准确计算细胞的数量大小形状等参数2免疫组化分析定量评估免疫组化染色的强度和分布3肿瘤诊断辅助帮助识别肿瘤细胞的特征辅助判断肿瘤的类型分级和分期4疾病监测与预后评估通过对病理图像的连续分析监测疾病的进展和评估治疗效果四优势1提高准确性减少人为因素导致的误差提供更客观准确的诊断结果2高效性能够快速处理大量的图像数据提高诊断效率3可重复性相同的图像可以进行多次分析结果具有较好的一致性4数据存储与共享便于图像数据的长期存储和远程共享方便多学科会诊五应用领域1肿瘤学如乳腺癌肺癌胃癌等的诊断和研究2神经病理学分析神经细胞的病变和退行性疾病3心血管病理学评估心血管组织的病理改变4感染性疾病诊断病原体引起的组织损伤六局限性1图像质量依赖于样本制备和采集过程2对于一些复杂的病理情况仍需要结合病理医生的经验和判断3设备成本较高维护和更新需要一定的投入七发展趋势1人工智能融合结合深度学习等人工智能技术进一步提高诊断的准确性和智能化水平2多模态分析结合免疫组化分子标记等多种信息进行综合分析3小型化和便携化便于在基层医疗机构和现场快速诊断中应用病理图像分析仪在现代病理学中发挥着越来越重要的作用不断推动着病理诊断向数字化精准化和智能化的方向发展

徕卡显微镜技术详解从白激光器到STED1白激光器激发光范围440790nm可调每个燃料可100激发覆盖近红外区域特点平均频率低于固定激光器不适用于漂白实验专利莱卡专利2HyD检测器光子计数模式减少噪音光谱检测带宽可调应用多色免疫组化活细胞长时程低毒性成像荧光寿命成像3荧光寿命成像技术电子在高能态停留时间ns97ps分辨率taucontrast获得pH或钙离子浓度差异tauseparation根据荧光寿命差异分为不同颜色标记分开串色自发荧光taugating去掉背景荧光tauinteractionFRETdonnor荧光寿命变短得到结合比率定性半定量4优点fastlive预览模式快扫模式共振扫描加DSE滚动平均大图拼接多点聚焦多孔板模版类似高内涵提高分辨率xy120nmz200nm普通是2006005其他技术STED分辨率5030nmz130nm受激发射损耗制样有要求标记密度染料浓度要大染料有要求SIM分辨率80nm活细胞更快tauSTED受激发射后荧光寿命变短可以区分并且去掉激光强度可以比STED更低适用活细胞FALCONFLIMFRET定量信息

免疫组化常见问题解答前四篇冰冻切片和石蜡切片的区别是什么冰冻切片和石蜡切片在取材和操作上有很大不同冰冻切片通常用于新鲜组织操作简单抗原活性好但保存时间短需要放在80的低温冰箱中而石蜡切片则使用10福尔马林溶液固定制备过程较复杂但切片薄35便于观察细胞的细微结构且常温保存即可非常方便如何选择一抗选择一抗时需要考虑以下几点单克隆抗体特异性强但亲和力相对小检测抗原灵敏度相对低而多克隆抗体特异性弱但抗体的亲和力强灵敏度高但易出现非特异性染色可通过封闭来避免抗体的比例可依据抗体说明书或westernblot的抗体比例来做即可对于组织样本一般要在37孵育12h或4冰箱孵育过夜效果最佳且拿出后需37复温45min并保持湿盒里的湿度来防止抗体蒸发对于难以着色的在第二天还需将湿盒置于室温孵育如何选择封闭血清封闭血清一般是和二抗同一来源可封闭非特异性结合位点降低背景噪音也可使用小牛血清BSA羊血清等但不能与一抗的来源一致冰冻切片和石蜡切片的取材方法有哪些冰冻切片的取材方法有两种动物灌流固定如小鼠心脏灌流首先采用预冷的1PBS灌流冲洗直至血液全部放出随后灌注4PFA直至小鼠僵直而后解剖获取组织于44PFA中固定1h左右1PBS洗5次30min次25蔗糖溶液脱水12h左右包埋即可直接取材直接选择新鲜组织进行冰冻切片此时不需要进行抗原修复缺点切出的片子含水量会比较多形成冰晶影响结果而且后期的丙酮固定也会改变细胞的形态石蜡切片的取材方法则是将动物组织取材灌流与否都可以并不影响后续的操作后置于10福尔马林溶液中固定34天后脱水包埋即可进行石蜡切片操作

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