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钠背景电流前沿信息_电流是什么意思通俗点(2024年12月实时热点)

内容来源：百业图库所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

钠背景电流

WB实验常见问题及解决方法，避开这些坑！ Western blot（WB）实验虽然基础，但总是让人头疼。即使是老手，也难免遇到各种问题。下面我根据经验总结了一些WB实验中常见的异常问题及解决方法，希望对正在做WB实验的小伙伴们有所帮助。无条带蛋白表达量低：首先，要充分了解你研究的蛋白，如果表达量低，可以适当增加上样量，一般在20-50之间。非特异性条带：有时候条带不明显是因为本底表达或诱导表达，非特异性条带导致的。蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂：在提取蛋白时，一定要使用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，并设置对照，避免蛋白降解。一抗特异性：检查一抗的特异性是否适合你的目的蛋白，最好买经过验证的一抗和二抗。转膜效率低：可以用丽春红染色检查转膜效率，特别是分子量小的蛋白，用小孔径的膜。调整转膜时间和电流：适当调整转膜的时间和电流，优化转膜效果。超敏发光液：如果分子量表达低，可以选择超敏的发光液。有阳性条带，但条带比较弱抗体染色不充分：增加抗体浓度，延长孵育时间。酶活性降低：将酶和底物直接混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内的酶联物。标本中靶蛋白含量太低：增加标本上样量。洗膜过度：缩短洗涤时间。 HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。抗体活性降低：选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免长时间放置。封闭过度：减少封闭剂的量或缩短时间，换用不同封闭剂类型。曝光时间过短：延长曝光时间。背景高上样量多：适当减少上样量。洗膜不充分：增加洗液体积和洗涤次数，原则可以快洗慢孵育。阻断不充分：选择合适的封闭试剂，增加封闭液孵育时间，封闭浓度。洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应。脱脂奶粉含有的酪蛋白是一种磷酸化蛋白，会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。抗体过多：降低抗体浓度，使用单抗，减少二抗孵育时间。检测过程中膜干燥：保证充分的反应液，避免出现干膜现象。曝光过度：缩短曝光时间。蛋白降解：使用新鲜样本，加入蛋白酶抑制剂，在冰上操作。膜的选择：用低背景的NC膜替换高背景的PVDF膜。蛋白剪切形式：查阅数据库文献，了解蛋白的特异性一抗。希望这些经验能帮助你顺利完成WB实验，避免踩坑！𐟒ꀀ

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